Потпуно отицање смоле
Измерити 2,0 г празне Ванг смоле у чистој и сувој реакционој епрувети, додати 15 мЛ ДМФ, активација на собној температури око 30 мин.
Узмите прву аминокиселину
На собној температури, филтрирати растварач из претходног корака кроз језгро песка и додати 1 ммол 5 моларног вишка Ц Прва аминокиселина на крају, 5-струки моларни вишак ДМАП, 5 моларни вишак ДИЦ, ДМФ Извршити реакцију на собној температури растварача 3 х. Употреба након што је реакција завршена ДМФ исперите 4 ~6 пута, 5-6 пута сваки пут мЛ. Затим додати одговарајућу количину пиридина и анхидрида сирћетне киселине у запреминском односу 1:1 и реаговати 30 мин. Употреба након што је реакција завршена ДМФ исперите 4 ~6 пута, 5-6 пута сваки пут мЛ. (ефекат: Блокирајте активне микротачке на нереактивној празној смоли.)
Фмоц Одлазак заштитних група
Уклоните растварач из претходног корака усисном филтрацијом и додајте 10 мЛ 20% пиперидина ДМФ. Раствор се додаје смоли, Н2 Мешајте 10 мин. На крају, филтрирајте раствор и додајте 10 мЛ 20% раствора пиперидина ДМФ, Н2 Дувајте и мешајте 5 мин. Затим филтрирајте раствор и поновите ову операцију два пута. ДМФ Опрати 4 пута, испрати 2 пута метанолом, 5-6 пута сваки пут мЛ.
Тестирање ефекта уклањања нинхидрина
Извадите малу количину смоле, исперите је три пута метанолом, додајте нинхидрин, КЦН, по једну кап раствора фенола, 105 степени –110 степени Загревање 5 мин. Претварање у тамно плаву боју је позитивна реакција, што указује да је уклањање завршено и да се може извршити следећи корак реакције.; Ако је безбојна, то значи да заштитна група није потпуно уклоњена и да је потребно поновити горенаведену операцију уклањања заштите.
Затим уклањање друге аминокиселине и Фмоц заштитне групе
Измерити 3-струки моларни вишак Ц Друга аминокиселина на крају, 3-струки моларни вишак ХБТУ и 3-струки моларни вишак ХОБТ-а. У реакциону епрувету додајте одговарајућу количину ДМФ-а Након што се раствор потпуно раствори, додајте 10-струки моларни вишак (чистог) ДИЕА, Реакција на собној температури 40 мин, користите ДМФ време прања 45 ~ 6Л пута. Узмите малу количину смоле. Тестирајте са реагенсом за детекцију нинхидрина и изгледаће безбојно, затим додајте 10 мЛ 20% пиперидин ДМФ раствора за уклањање Фмоц, Урадите ово два пута по 10 мин, 5 мин, након употребе ДМФ оперите 4 пута, оперите 2 пута метанолом, 5-6 пута сваки пут мЛ. Уклоните малу количину смоле. Користите реагенс за детекцију нинхидрина да бисте је открили. Ако је детекција плава, можете прећи на следећи корак реакције.
По аналогији, понављајте кораке 2.6 док синтеза не буде Н. Уклоните последњу амино киселину на крају Фмоц Протецт базе, а затим оцедите.
Одвајање смоле и чисто одвајање и детекција производа
Коначно, употребите раствор за резање трифлуоросирћетне киселине (95% ТФА:2% ТИС:2% ЕДТ:1% Х2О) Сеците 2 х, филтрирајте реакциони раствор усисавањем и добијете раствор трифлуоросирћетне киселине полипептида. Лизат осушити азотом што је више могуће, преципитирати етром, центрифугирати, а затим испрати етром 3 секунде. ~5 пута, добија се бела чврста супстанца. Након што га растворите у чистој води, ХПЛЦ одсолите и пречистите, осушите{11}} замрзавањем и преципитате кристале, узмите малу количину МС анализе.